Las muestras son preparadas por los usuarios basándose en la utilización de diversos marcadores fluorescentes “in vivo” en la muestra (en el caso de adquisición de imágenes a tiempo real) o bien mediante el uso de técnicas de inmunofluorescencia.
La unidad ofrece diferentes servicios de microscopía confocal a los usuarios, y las tarifas a aplicar dependen de la actividad a realizar.
Además, la unidad ofrece asesoramiento técnico para la cuantificación, procesamiento y análisis de imágenes mediante software específico de análisis de imágenes y estadísticos, esenciales en la interpretación de los resultados.
Una de las aplicaciones más frecuentes en nuestra Unidad es la adquisición de imágenes a partir de muestras fijadas y marcadas mediante técnicas de inmunofluorescencia, con uno o múltiples fluorocromos.
Por otra parte, hay determinados procesos biológicos que por sus características requieren una visualización directa, por lo que la muestra debe estar viva (ya sea un cultivo celular o un organismo).
En estos casos, nuestra Unidad ofrece aplicaciones como las siguientes:
• Time lapse fluorescence imaging
• FRAP: Fluorescence Recovery After Photobleaching
• FLIP: Fluorescence Loss in Photobleaching
• FRET: Fluorescence Resonance Energy Transfer
• Photoactivation y Photoswitching
• Fluorescencia combinada: adquisición de imágenes con fluorescencia y luz transmitida simultáneamente.
La mayoría de las aplicaciones ofertadas por nuestra Unidad necesitan plataformas de análisis de imagen específicas tras la adquisición de imágenes. Es por ello que también ofrecemos asesoramiento para la cuantificación y procesamiento de imágenes con programas como Metamorph, ImageJ y Fiji.
Para solicitar cualquiera de nuestros servicios, previamente debe hacerse una reserva con, al menos, una semana de antelación.
En todos los casos el responsable técnico de la unidad controlará y manejará el microscopio y software.
Para el desarrollo de sus servicios, la Unidad de Microscopía de CABIMER cuenta con el siguiente equipamiento:
• Microscopio Confocal Leica TCS SP5 (AOBS).Dispone de las siguientes líneas de excitación: 405, 458, 476, 488, 496, 514, 561, 594 y 633nm. Este sistema está dotado de una cabina termostatizada que permite realizar experimentos “in vivo”.
• Microscopio Confocal Leica TCS SP5 (Dic. Conv.). Dispone de las siguientes líneas de excitación: 458, 476, 488, 496, 514, 543 y 633nm.
• Microscopio Confocal de Disco giratorio (Spinning disk). Dispone de las líneas láser 405nm, 488nm, 561nm y 642nm para las aplicaciones de microscopía en vivo, FRAP y TIRF.
• Microscopio Thunder Imager. Para muestras fijadas y experimentos de células vivas Microscopio invertido DMi8 con 8 LEDs para excitación (390, 440, 475, 510, 555, 575, 635 y 747), cámara de alta resolución K5, platina de alta velocidad, algoritmos de deconvolución Thunder y reconstrucción 3D. Adicionalmente dispone de un sistema de incubación en platina y CO2 (Okolab-UNO) para los experimentos con células vivas.
• Microscopio invertido DMi6. Para muestras fijadas y experimentos de células vivas. Microscopio invertido con lámpara EL6000 para fluorescencia (filtros A4, L5 y TX2), cámara de alta resolución K5 y deconvolución Leica. Análogamente dispone de un sistema de incubación de cabina y CO2 (PECON) para los experimentos con células vivas.
• Estereomicroscopio: Equipo financiado por la ayudas a infraestructuras y equipamientos de I+D+i para entidades de carácter público con referencia IE19-101-USE concedida por la Consejería de Transformación Económica, Industria, Conocimiento y Universidades (PAIDI 2020)
• Complementos Microscopía. Objetivos y filtros: Equipo financiado por la ayudas a infraestructuras y equipamientos de I+D+i para entidades de carácter público con referencia IE19-101-USE concedida por la Consejería de Transformación Económica, Industria, Conocimiento y Universidades (PAIDI 2020)
Manuales y normativas
Puede consultar el manual de uso de aparatos y normativas en este enlace.
A la hora de elegir los mejores marcadores fluorescentes para un experimento y optimizar combinaciones múltiples, existen varias páginas webs donde podemos comprobar los espectros de excitación y emisión de cada marcador y decidir cuál es la combinación más óptima para el experimento en curso, teniendo en cuenta los equipos disponibles en el centro. Uno de estos sitios útiles es:
A continuación se enumeran algunas publicaciones cuyas imágenes han sido adquiridas en los equipos de la Unidad de Microscopía de CABIMER:
- C C Lachaud , N Cobo-Vuilleumier , E Fuente-Martin , I Diaz , E Andreu , G M Cahuana , J R Tejedo , A Hmadcha , B R Gauthier , B Soria. 2023. Umbilical cord mesenchymal stromal cells transplantation delays the onset of hyperglycemia in the RIP-B71 mouse model of experimental autoimmune diabetes through multiple immunosuppressive and anti-inflammatory responses. Front Cell Dev Biol. 11:1089817.
- González-Garrido C, Prado F. 2023. Parental histone distribution and location of the replication obstacle at nascent strands control homologous recombination. Cell Rep. 42(3):112174.
- González-Arzola K, Díaz-Quintana A, Bernardo-García N, Martínez-Fábregas J, Rivero-Rodríguez F, Casado-Combreras MÁ, Elena-Real CA, Velázquez-Cruz A, Gil-Caballero S, Velázquez-Campoy A, Szulc E, Gavilán MP, Ayala I, Arranz R, Ríos RM, Salvatella X, Valpuesta JM, Hermoso JA, De la Rosa MA, Díaz-Moreno I. 2022. Nucleus-translocated mitochondrial cytochrome c liberates nucleophosmin-sequestered ARF tumor suppressor by changing nucleolar liquid-liquid phase separation. Nat Struct Mol Biol. 29(10):1024-1036.
- González-Sánchez Z, Areal-Quecuty V, Jimenez-Guerra A, Cabanillas-Balsera D, Gil FJ, Velasco-Ortega E, Pozo D. 2022. Titanium Surface Characteristics Induce the Specific Reprogramming of Toll-like Receptor Signaling in Macrophages. Int J Mol Sci. 23(8):4285.
Puede consultar las tarifas en este enlace o ponerse en contacto con nosotros en
el teléfono 95 446 8223 o en el correo electrónico microscopia@cabimer.es.